BD CBA流式液相多重蛋白定量技术

在生物医学研究中，液相蛋白定量检测是不·可或·缺的环节。然而，传统检测技术大多只能针对单一指标进行分析，若需同时检测多个指标，则需大量样本分批检测，操作繁琐且各指标间差异较大。对于样本量较少或需对比各指标的研究者而言，传统技术难以满足需求。例如，在细胞培养上清或血清中，细胞因子含量较低，常低于常规检测方法的下限，使用Western Blot等常规蛋白检测方法难以奏效。为此，BD-Pharmingen公司开发了一种基于流式细胞仪的液相蛋白定量技术——CBA（Cytometric Bead Array，细胞因子微球检测技术），为这一难题提供了有效解决方案。

CBA技术原理CBA是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，可同时对单个样品中的多个指标进行检测。BD公司借助流式细胞仪对荧光信号具有级数放大的特性，将待测的可溶性因子附着于近似细胞直径的微粒上，从而实现对样品中多种可溶性因子的检测。其基本原理与ELISA相似，通过微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治"结构的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，进而测定待测物的数量。

在CBA检测过程中，每个微球大小一致，带有特定荧光强度，并包被有特异性捕获抗体，为待测物提供类似ELISA孔板的捕获表面。当微球与待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体与样品中的相应抗原或蛋白结合，随后加入荧光标记的检测抗体，形成“三明治"夹心复合物。通过流式细胞仪，CBA可对特异性目的蛋白进行检测。每种微球携带不同强度的红色荧光，通过流式细胞仪的FL3通道检测微球荧光强度差异实现目的蛋白的定性；检测抗体带有PE荧光素标记，在FL2通道检测，通过检测抗体的PE荧光强度实现目的蛋白的定量。

CBA技术特点CBA融合了ELISA和细胞流式技术的优点，是一种先进的液相蛋白检测技术。与ELISA相比，CBA的捕获微球呈悬浮态，能更高效地捕获被分析物；同时，它还具备流式细胞仪宽范围荧光检测的特点，对样本需求量少，检测快速且准确。以下是CBA的主要技术特点：

1.多重检测能力：CBA最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行定量，大大提高了检测效率，满足了复杂样本分析的需求。

2.样本需求量少：仅需50μL溶液即可进行一次检测，这对于样本量有限的研究具有重要意义，减少了样本采集的困难和成本。

3.高灵敏度、宽检测范围和良好重复性：CBA的分析灵敏度高达2.8pg/mL，检测范围可达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。这种技术通过抗体的荧光强度对目的蛋白定量，避免了ELISA中酶联放大可能产生的假阳性结果，提高了检测的准确性和可靠性。

4.灵活的检测对象组合：传统的CBA试剂盒通常包含固定的6个指标，形式较为固定。为了满足不同客户的实际需求和研究兴趣，BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set。这一创新改变了传统CBA试剂盒的固定形式，使其成为自由组合、灵活搭配的“自助餐"。研究者可以根据需要组合不同的捕获微球来检测多个指标，最多能同时检测75个指标。除了继承CBA试剂盒的优势外，CBA Flex Set还配备了独立的软件分析系统（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板进行操作。这种灵活性赋予了研究者更大的选择空间，进一步丰富了CBA产品线，涵盖了免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等多个领域的蛋白定量分析。

5.操作简便，省时省力：CBA技术采用芯片式集成测定，所有检测只需一组标准曲线即可计算出每种待测蛋白的浓度。操作流程简单，整个检测过程仅需3.5小时，可对样本进行实时分析，显著缩短了检测时间，提高了检测效率，使研究人员能够更快速地获得实验结果，加速研究进程。

总之，CBA技术以其多重检测能力、低样本需求、高灵敏度、宽检测范围、良好重复性、灵活的检测对象组合以及简便的操作流程等优势，为液相蛋白定量检测领域带来了革新，为生物医学研究提供了强大的技术支持。

产品应用
自CBA上市以来，越来越多的科研和临床研究人员将CBA应用于他们的领域。CBA应用领域涉及眼泪、血清、唾液、细胞培养上清等样本中细胞因子、炎症因子的水平的分析。CBA还用于细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白分析，系统性红斑狼疮（SLE）和新生儿脓血症等免疫疾病的监控，肿瘤研究，药物对病人的治疗效果评估，药物研发，疫苗研究，总体免疫功能分析等多领域。

CBA产品信息见下表: